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病毒载体系列丨腺相关病毒(AAV)载体

 

腺相关病毒AAV有表达滴度高、宿主免疫反应轻微、感染谱广、安全性高等优势,成为近年来在基因治疗领域应用广泛的病毒载体之一。西美杰代理Cell Biolabs AAV Helper Free Expression System)的AAV三质粒表达系统是目前常用的一类AAV载体系统

https://www.cellbiolabs.com/sites/default/files/VPK-402%20Fig%201_0.jpg

图所示,该套AAV系统包含表达载体(Expression vector)、包装质粒Rep-Cap plasmid)和辅助质粒pHelper plasmid)。其中表达载体是AAV病毒的核心,包含了ITR序列、CMV启动子、多克隆位点等,用于携带外源基因;包装质粒负责表达AAV病毒的结构蛋白,决定AAV的血清型和组织嗜性。由于野生型AAV是复制缺陷型的,必须依赖辅助病毒(如腺病毒)才可以感染靶细胞。AAV Helper Free Expression System利用在不同质粒上提供这些必要的辅助基因来确保重组AAV病毒具有感染性,消除AAV对辅助病毒的依赖解决了AAV生产过程中要去除腺病毒污染难题



      Expression vector包含ITR序列,多克隆位点,携带目的基因;

      Rep-Cap plasmid包含RepCap基因,决定了重组AAV的血清型和组织嗜性;

      pHelper plasmid 包含腺病毒的VAE2AE4基因,使重组AAV具有感染性。

  1. AAV表达载体

AAV基因组为4。7kb,能够携带的外源基因上限在4kb左右。Cell Biolabs提供了8AAV的表达载体,兼容常用的各种AAV包装系统,表达载体都携带有2ITR序列,使AAV基因组能正确形成T-形二级结构,进而保证了病毒的有效复制和包装。载体上有氨苄抗性基因、多克隆位点,还可以根据实验需要选择带标签、无标签、不含启动子或自身互补型self-complementaryAAV表达载体(产品详情如下表)

货号

质粒名称

载体容量(kb

特征

VPK-415

pAAV-IRES-Puro

1.8

Puro标签

VPK-416

pAAV-IRES-Neo

1.6

Neo标签

VPK-417

pAAV-IRES-Hygro

1.4

Hygro标签

VPK-418

pAAV-IRES-GFP

1。7

GFP标签

VPK-419

pAAV-IRES-Bsd

2

BSD标签

VPK-410

pAAV-MCS

3

无标签

VPK-411

pAAV-MCS Promoterless

4

启动子

VPK-430

pscAAV-MCS

1.5

self-complementary

 

 

  1. AAV包装质粒

AAV共有12个血清型,其中AAV1-6是从人类组织中分离获得,并且具有明确的的抗体反应性,是目前常用的经典AAV载体。尽管不同血清型AAV都具有正二十面体结构,但其衣壳蛋白在序列与空间构象上的多样性,使得AAV与不同细胞表面受体亲和力及组织嗜性存在显著差异。在感染嗜性方面,AAV-2的感染谱较广应用,AAV-1在骨骼肌中的转导效率较高,AAV-3易于转导巨核细胞,AAV-5AAV-6感染呼吸道上皮细胞的优势较为显著。因此,根据AAV不同血清型在组织感染性的相对特异性,可以用于在针对不同靶向组织的基因治疗中寻求最佳的AAV载体类型与组合。除了常见的六个血清型AAV之外,Cell Biolabs还提供两种重组型AAV包装质粒AAV-DJAAV-DJ-8,如下图所示,这两种AAVRep-Cap基因是由多个野生型AAV的结构基因重组而来,与其他野生型相比AAV-DJ在体外细胞转导效率更高,AAV-DJ-8则更适用于体内感染实验

常用的AAV-2为参照,下表比较不同血清型AAV对种属、组织细胞的感染率。值得一提的是,AAV-DJ对不同物种的肝细胞、黑色素瘤细胞以及胚胎干细胞的感染能力都有绝对优势,甚至高于常用的AAV-2

辅助质粒pHelper plasmid是确保重组AAV具有感染性的重要质粒pHelper载体中包含了腺病毒的E2AE4基因VA RNA,由于我们常用的AAV包装细胞系293293T含有E1基因,因此该系统中的pHelper质粒上没有再提供E1基因。

AAV包装质粒货号Rep-Cap&pHelper plasmids

VPK-401

VPK-402

VPK-403

VPK-404

VPK-405

VPK-406

VPK-400-DJ

VPK-400-DJ-8

细胞系

组织类型

AAV-1

AAV-2

AAV-3

AAV-4

AAV-5

AAV-6

AAV-DJ

AAV-DJ/8

Huh-7

人肝脏

13

100

2.5

0.0

0.1

10

500

0.2

HEK293

人肾脏

25

100

2.5

0.1

0.1

5

500

0.3

HeLa

人子宫

3

100

2.0

0.1

6.7

1

667

0.2

HepG2

人肝脏

3

100

16。7

0.3

1。7

5

1250

0.5

Hep1A

小鼠肝脏

20

100

0.2

1。0

0.1

1

400

0.1

911

人视网膜

17

100

11

0.2

0。1

17

500

0.0

CHO

仓鼠卵巢

100

100

14

1。4

333

50

25000

5。0

COS

非洲绿猴肾脏

33

100

33

3.3

5.0

14

500

0.3

MeWo

人皮肤

10

100

20

0.3

6。7

10

2857

1。0

NIH3T3

小鼠成纤维

10

100

2。9

2.9

0.3

10

500

0.1

A549

人肺脏

14

100

20

ND

0.5

10

1000

0。1

HT1180

人成纤维

20

100

10

0。1

0.3

33

333

0.2

Monocytes

人原代单核细胞

1111

100

ND

ND

125

1429

100

ND

Immature DC

人树突细胞

2500

100

ND

ND

222

2857

200

ND

Mature DC

人树突细胞

2222

100

ND

ND

333

3333

100

ND

ND = Not Determined


 

西美杰代理的Cell Biolabs品牌除了提供AAV病毒的全套载体系统外,还有腺病毒(Adenovirus),慢病毒(Lentivirus)和逆转录病毒(Retrovirus)载体系统,为广大科研用户提供了高效、便捷的病毒载体产品库,小编之后还会一一为大家介绍这些病毒载体,敬请期待!

北京西美杰科技有限公司作为Cell Biolabs中国区代理,始终秉承着专业、严谨的态度为广大生物科技领域科研与企业客户提供高品质产品与优质服务,如果您对上述产品感兴趣,欢迎随时拨打全国客服热线400-050-4006或登录西美杰官方网站www.fdbl-art.com查询订购!

 

 

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